Иммуногистохимическая диагностика

Антитела (иммуноглобулины) представляют собой белки, позволяющие иммунной системе определять и уничтожать чужеродное «вторжение». Являясь для нашего организма защитным барьером, они борются с инфекционными возбудителями (бактериями, вирусами), атипичными клетками, токсинами, аллергенами. Каждое антитело распознает определенный патоген, называемый «антиген», связывается с ним.

Иммуноглобулины применяют в лабораторной практике с 40-х годов прошлого столетия. Патолог и иммунолог Кунс начал маркировать антитела флуоресцентным веществом с целью определения антигена в исследуемом материале. Широкое распространение направление получило только спустя полвека.

В многопрофильном медцентре «Медскан» на должном уровне проводится иммуногистохимический анализ.

Чтобы узнать цены на лечебные, диагностические процедуры, позвоните в колл-центр клиники.

Что такое иммуногистохимия

Иммуногистохимическое исследование (ИГХ) — метод, подразумевающий обнаружение в образце определенного антигена с помощью белков, продуцируемых собственной иммунной системой. Гистологический препарат проходит обработку реактивными красителями, содержащими меченые антитела к нужной молекуле (антигену). Итогом анализа становится формирование комплекса «антиген-антитело», окрашивание тканевого фрагмента.

Диагностическую манипуляцию используют с целью обнаружения разных патологических процессов. Важную роль она играет в выявлении онкологических заболеваний.

ИГХ на современном этапе дает возможность:

1. Уточнить происхождение исследуемого биоматериала, степень злокачественности.
2. Установить гистологический диагноз изучаемой опухоли.
3. Обнаружить первичное образование по ранее выявленном в вторичному (метастатическому) очагу.
4. Определить прогноз онкопатологии.
5. Уточнить резистентность (устойчивость) раковых клеток к цитостатикам, чувствительность к радиотерапии, возможности использования таргетных препаратов.

Факторы, влияющие на прогноз заболевания, — рецепторы к эстрогенам, прогестерону, эпидермальный фактор роста, гистологическая степень злокачественности, регулятор апоптоза, р53 (многофункциональный опухолевый супрессор) и т.д.

Методика нашла свое применение в выявлении системной патологии соединительной ткани, проблем с мочевыделительной системой — почками. Процедура помогает обнаружить бактериальную, вирусную микрофлору (ВПЧ, HPV — вирус папилломы человека, вирус Эпштейна-Барр) в тканевом образце.

Доктор изучает полученное иммуногистохимическое заключение с положительными, отрицательными маркерами, что позволяет поставить окончательный диагноз. Для примера: с целью диагностики фолликулярных новообразований щитовидной железы рекомендуется использование ряда онкомаркеров. Наиболее чувствительными считаются тиреокальцитонин, мезотелин, цитокератин 19, тиреоглобулин и другие.

Рак шейки матки (РШМ) — одна из основных причин смерти молодых женщин в Российской Федерации. Появление 95% опухолей шейки матки обусловлено наличием в организме больной HPV. Согласно статистическим данным, более 70% клинических случаев связаны с 16-м, 18-м онкогенными типами вируса. Проникая в эпителиальные клетки, ВПЧ становится причиной генных мутаций, способствует формированию злокачественного образования.

ИГХ-исследование помогает выявить экспрессию белков p16 и p18. Также можно дифференцировать изменения эпителия неопухолевой природы с поражением, способным со временем трансформироваться в рак. На основании анализа гистолог различает патологические очаги, которые с высокой вероятностью в будущем разовьются в инвазивную карциному. У пациенток со слабой дисплазией обнаружение диффузной экспрессии — свидетельство о прогрессировании онкопатологии.

Целиакия представляет собой аутоиммунный процесс, характеризующийся повреждением тонкого кишечника, врожденной непереносимостью глютена. Болезнь сопровождается увеличением количества лимфоцитов внутри клеток кишки. Чем их больше, тем ярче будет клиническая картина. Иммуногистохимический анализ, способствующий определению преобладающего вида лимфоцитов, помогает в постановке диагноза «целиакия».

Иммуногистохимические методы диагностики

Различают прямой и непрямой методы иммуногистохимии.

Прямой подразумевает взаимодействие маркированного антитела-молекулы с патогеном-мишенью. Окрашивание фрагмента свидетельствует о наличии патогенного вещества.

В большинстве случаев к молекуле присоединяют фермент, выступающий катализатором химической реакции, ведущей к перемене окраски. При окрашивании флуоресцентным красителем патоморфологу понадобится специальное оборудование — флуоресцентный микроскоп.

Непрямой вариант применяется чаще за счет большей чувствительности. Методика предполагает применение двух разных молекул. Немаркированные (первичные) антитела реагируют с искомым элементом-антигеном. Маркированные (вторичные) молекулы связываются со сформированным комплексом «первичное антитело-атипичная клетка». Преимущества непрямого варианта:

• для проведения анализа допускается небольшой объем биоматериала;
• высокая чувствительность обусловлена связыванием с первичным антителом нескольких вторичных молекул;
• реакция протекает в более короткие сроки (в сравнении с прямым способом).

Когда назначается исследование

Показания к выполнению ИГХ-диагностики:

• Определение точной локализации новообразования.
• Уточнение наличие в опухолевой ткани особых рецепторов гормонов , сигнальных гормонов.
• Выявление предрака (предопухолевого состояния) — патология, способствующая возникновению злокачественной опухоли.
• Выявление раковых клеток в лимфоузлах.
• Дифференциальная диагностика доброкачественных и злокачественных очагов.
• Подбор рациональных терапевтических методов, определение чувствительности атипичных клеток к цитостатикам, лучевой, таргетной терапии.
• Оценка эффективности терапии, наступления ремиссии, прогноза болезни.
• Поиск первичного источника метастазов.
• Выяснение типа низкодифференцированного новообразования.
• Выявление целиакии, для которой характерно спорное гистологическое заключение.

Анализ проводится с целью уточнения гормонального статуса — фактора, определяющего риск некоторых раковых опухолей. Такие очаги развиваются в результате повышенной гормональной стимуляции структуры.

Подготовка к анализу

За пару недель до посещения клиники исключается прием новых лекарственных средств (без предварительного согласования с лечащим врачом). Также следует отказаться от химиотерапевтических препаратов и других медикаментов, воздействующих на клеточный состав.

Другие рекомендации по подготовке:

• Избегать стрессов, физической активности за 3-4 дня до обследования.
• Отказ от алкоголя за пару дней до анализа.
• Последний прием пищи должен состояться за 8-10 часов до манипуляции. Это объясняется использованием местной анестезии (или общего наркоза) для забора тканевого образца.

Особенности процедуры

Перед выполнением теста необходимо сделать биопсию. Врач специальным инструментом (иглой-трепаном) или в ходе операции забирает частицу интересующего органа или структуру целиком. Биоптат транспортируют в лабораторию, где лаборант готовит препарат для анализа. Фрагмент фиксируют в растворе, заливают парафином в гистологические кассеты. Блок нарезается на тонкие срезы и крепят на предметные стекла, после чего устраняется парафин (депарафинизация).

На срез сначала наносятся антитела, затем — современные системы визуализации комплекса «антиген-антитело». По показаниям выполняется окраска гематоксилин-эозином.

Врач-патоморфолог изучает препарат под микроскопом, определяет присутствие атипичных клеток, оценивает их состояние.

Какие молекулы-мишени выявляют во время иммуногистохимии?

В онкологии такими мишенями называют онкомаркеры, у которых здоровые клетки совершенно отсутствуют (или обнаруживают минимальное их число). Наиболее распространенные онкомаркеры:

• Простатспецифический антиген (ПСА) — назначается для выявления рака предстательной железы.
• Цитокератины — актуально для диагностики немелкоклеточного рака легких, онкопатологии мочевого пузыря, шейки матки и др.
• Неприлизин (CD10 — кластер дифференциации 10) — антиген, обнаруживаемый при остром лимфобластном лейкозе.
• Альфа-фетопротеин — онкомаркер первичной злокачественной опухоли (карциномы) печени.
• Эстрогеновые, прогестероновые рецепторы — анализ делают при подозрении на рак молочной железы.

Что показывает?

ИГХ-исследование позволяет онкологам оценить характеристики злокачественного очага, что в полной мере не дают сделать другие методы обследования. Именно иммуногистохимическая диагностика помогает поставить окончательный диагноз, разработать индивидуальную лечебную программу.

ИГХ способствует реализации принципа персонифицированной терапии. Это означает, что для отдельно взятого больного подбирается максимально результативная комбинация препаратов.

Результаты ИГХ

В заключении указывается наличие или отсутствие измененных клеточных элементов.

Для каждого типа антител обозначается степень распространения (концентрации) иммунных комплексов «плюсами»:

1. Один плюс — низкая концентрация раковых клеток.
2. Два плюса — средняя степень распространения.
3. Три плюса — множество атипичных клеток, риск формирования метастатических очагов.

Информация в лабораторном бланке не является диагнозом. Расшифровкой результатов и постановкой окончательного диагноза занимается лечащий доктор.

Преимущества обращения в Медскан

Преимущества проведения ИГХ-диагностики:

1. Прием ведут высококвалифицированные специалисты с многолетним опытом работы.
2. Аппаратура экспертного класса. Оборудование необходимо для забора биоптата или проведения оперативного вмешательства, предшествующих выполнению иммуногистохимии.
3. Мировые стандарты. Врачи ориентируются на проверенные международные протоколы с доказанной эффективностью.
4. «Медскан» сотрудничает с ведущими лабораториями Москвы.
5. Персонализированный подход к каждому пациенту.
6. Высококлассный сервис.
7. Услуга «второе мнение». Мы предоставляем своим пациентам воспользоваться возможностью получить независимое мнение специалиста того же профиля.
8. Качественная психологическая помощь.

Запись на консультацию к врачу или на лабораторную, инструментальную диагностику осуществляется по номеру телефона медицинского центра.

Источники

1. Oumarou Hama H, Aboudharam G, Barbieri R, Lepidi H, Drancourt M. Immunohistochemical diagnosis of human infectious diseases: a review // Diagn Pathol. — 2022. Источник: pubmed.ncbi.nlm.nih.gov
2. Стяжкина С. Н., Порываева Е. Л., Шарипова Р. А., Вьюжанина А. Ю. Иммуногистохимическое исследование щитовидной железы // MODERN SCIENCE. — 2021. Источник: elibrary.ru
3. Клинические рекомендации по диагностике и лечению лимфопролиферативных заболеваний // Министерство здравоохранения Российской Федерации. — 2018. Источник: rusoncohem.ru
4. Семенов В. М., Пашинская Е. С., Побяржин В. В., Субботина И. А. и другие. Иммуногистохимические и молекулярно-генетические методы диагностики онкологических заболеваний (обзор литературы) // Вестник Витебского Государственного медицинского университета. — 2017. Источник: cyberleninka.ru
5. Мозеров С. А., Комин Ю. А., Мозерова Е. С., Новиков Н. Ю., Красовитова О. В., Корнилецкий И. Д. Иммуногистохимия в оценке степени патоморфоза злокачественных новообразований // Здоровье и образование в XXI веке. — 2016. Источник: cyberleninka.ru
6. Богомолов Д.В., Богомолова И.Н., Завалишина Л.Э., Ковалев А.В., Кульбицкий Б.Н., Федулова М.В. Перспективы использования методов иммуногистохимии для установления прижизненности и давности механических повреждений в судебно-медицинской практике // Судебно-медицинская экспертиза. — 2014. Источник: mediasphera.ru
7. Иммуногистохимические методы: руководство / Ed. by George L. Kumar, Lars Rudbeck.: DAKO / перевод с англ. Г.А. Франка, П.Г. Маликова, — M., 2011. Источник: istina.msu.ru
8. Иванцов А.О., Мацко Д.Е. Возможности иммуногистохимического исследования в диагностике опухолей // Практическая онкология. — 2011. Источник: practical-oncology.ru

Записаться